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以下是兔子白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合整理:
BS-4207 兔子白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒
一、實驗原理
采用雙抗體夾心法:包被抗IL-1β抗體的微孔板捕獲樣本中的IL-1β,再與HRP標記的檢測抗體結合形成復合物,TMB顯色后通過OD值定量分析。
二、試劑盒組成
標準品?:通常為凍干粉(如2700ng/L),需用稀釋液復溶
酶標試劑?:HRP標記的檢測抗體(3ml/6ml)
洗滌緩沖液?:50×濃縮液,需蒸餾水稀釋
底物(TMB)?和?終止液?各12ml
封板膜?、?密封袋?及說明書
三、樣本處理要求
血清/血漿?:
避免溶血,離心條件:2000-3000rpm×10-30分鐘
短期保存于2-8℃,長期需-20℃以下分裝,避免反復凍融
組織勻漿?:
按重量加入PBS勻漿,離心取上清
細胞上清?:
離心去除碎片后分裝凍存
注意事項?:
避免使用含NaN3的樣本(抑制HRP活性)
四、操作步驟
標準品稀釋?:梯度稀釋至7個濃度,第8孔為空白對照
加樣?:
標準品/樣本各加50-100μl,37℃孵育1-2小時
洗滌?:
使用稀釋后的洗滌液,洗板4-6次,拍干
顯色?:
加TMB避光反應15-30分鐘,終止后15分鐘內測OD450nm
五、注意事項
試劑使用前需平衡至室溫,避免泡沫產生
不同批號試劑不可混用,底物需避光保存
顯色后若OD值超出標準曲線范圍,需稀釋樣本復測
六、數據計算
以標準品濃度為橫坐標、OD值為縱坐標繪制曲線,通過回歸方程計算樣本濃度。
注:以上資料僅供參考,如需具體品牌試劑盒的完整說明書,可參考對應廠商提供的文檔。
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