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大鼠白介素12(IL-12P70)ELISA試劑盒的實驗原理基于?雙抗體夾心法?,通過特異性抗體捕獲目標蛋白并放大信號,最終實現定量檢測。以下是詳細解析:
1. ?核心原理?
雙抗體夾心?:試劑盒采用兩種高親和力抗體,分別針對IL-12P70的不同表位。
包被抗體?:預包被在酶標板上的抗大鼠IL-12單抗,捕獲樣本中的IL-12P70?。
檢測抗體?:生物素標記的抗IL-12抗體,與已結合的IL-12P70形成“夾心"復合物?。
信號放大?:通過辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)與生物素結合,催化底物顯色(TMB),顯色強度與IL-12P70濃度成正比?。
2. ?實驗流程?
樣本孵育?:標準品或待測樣本與包被抗體反應,特異性結合IL-12P70?。
洗滌?:去除未結合物質,減少背景干擾?。
檢測抗體孵育?:生物素化抗體與IL-12P70結合,形成復合物?。
酶標記物反應?:HRP-鏈霉親和素與生物素結合,催化TMB顯色?。
終止與檢測?:加入終止液后,在450nm波長測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算濃度?。
3. ?技術特點?
高特異性?:抗體僅識別IL-12P70(p35/p40異源二聚體),避免與其他亞型(如p40同源二聚體)交叉反應?。
靈敏度?:檢測限通常為0.156-10ng/mL,適用于低濃度樣本?。
樣本兼容性?:支持血清、血漿、細胞培養上清等樣本類型?。
4. ?應用場景?
免疫研究?:評估Th1/Th2細胞平衡及IFN-γ分泌水平?。
疾病模型?:如哮喘、腫瘤微環境中的IL-12動態監測?。
注意事項
樣本處理?:避免反復凍融,尿液樣本需離心去除顆粒物?。
干擾因素?:NaN3會抑制HRP活性,需避免使用含防腐劑的樣本?。
注:僅供科研使用,以上資料供參考,如需具體產品說明請咨詢技術老師或品牌供應商。
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